الخالط بالموجات فوق الصوتية

الأسئلة المتداولة حول الخلايا المكسورة http://www.scientzbio.com/

ما هي شروط صوتنة Streptomyces (actinomycetes)؟

تحليلي: ينتمي الأكتينوميسيتات إلى نسبة (G + C) المولية (٪ مول) من المجموعة المتفرعة موجبة الجرام (Eubacteria) على شجرة النشوء النسجي لنظام Prokaryotic ، الذي له الخصائص الجزيئية والبيولوجية الفريدة ل prokaryotes. ومع ذلك ، في المجموعات المختلفة ، يختلف التركيب الكيميائي للجدار الخلوي بشكل كبير.

في الموجات فوق الصوتية E. coli ، يتم استخدام 400W ، وطريقة كسر 5S لمدة 5S فعالة ، ولكن يتم استخدامها على Streptomyces ، وليس لها أي تأثير بسبب الاختلاف في تكوين جدار الخلية. عموما يتم تجهيز العلاج قبل الغزل من Streptomyces (actinomycetes) إلى تركيز معين من تعليق البكتيرية. الظروف المحددة للتكسير باستخدام عطل الخلية فوق الصوتية هي: جمع البكتيريا في حل استزراع 24 ساعة في 5 000 ص / دقيقة لمدة 5 دقائق لجمع الخلايا. غسل مع 7.5 درجة الحموضة Na2HPO -NaH2PO العازلة 3 مرات ، ثم تم صياغة الخلايا في تعليق البكتيرية 1: 3 باستخدام المخزن المؤقت. وضعت في 40 مل كبير أنبوب اختبار البلاستيك. ضع أنبوب الاختبار البلاستيكي الكبير في حمام جليدي وسحقه بمزيل الخلايا فوق الصوتية (قوة 200 واط ، 1/2 "دققي ، سحق لمدة 30 ثانية ، 30 ثانية متقطعة) ؛ حل التكسير عند 12000 لفة / دقيقة جهاز للطرد المركزي بسرعة عالية لمدة 30 كما يمكن غسل خلايا الغسيل وغسلها مرة واحدة باستخدام محلول ملحي مبرد أو تريس-حمض الهيدروكلوريك عند الرقم الهيدروجيني 8. بالإضافة إلى ذلك ، تختلف الجرعة بالموجات فوق الصوتية بشكل كبير مع كمية العينة والبكتيريا ، ويمكن أن تكون الطاقة 400- 600 واط ، سحق لمدة 5S ، توقف لمدة 5S ، حمام جليدي ، ويضاف التركيز النهائي من PMSF 1 ملم. من أجل تحديد كثافة الموجات فوق الصوتية وتواتر المناسبة ، فمن الضروري للتحقق ما إذا كانت البكتيريا مكسورة تماما في أي وقت.